光學(xué)顯微鏡的主要參數(shù)包括?放大倍數(shù)、?數(shù)值孔徑(NA)、?分辨率、?視場(chǎng)、?景深和?工作距離等。

一、放大倍數(shù)

光學(xué)顯微鏡的放大倍數(shù)，是指物體經(jīng)過(guò)顯微鏡成像后放大的比例，這一比例是由目鏡的放大倍數(shù)與物鏡的放大倍數(shù)相乘得到的。例如，目鏡的放大倍數(shù)是10倍，物鏡的放大倍數(shù)是40倍，那么該顯微鏡的總放大倍數(shù)就是10乘以40，即400倍。

光學(xué)顯微鏡的放大倍數(shù)的計(jì)算公式為：總放大倍數(shù) = 目鏡放大倍數(shù)×物鏡放大倍數(shù)。

值得注意的是，雖然放大倍數(shù)越高，觀察到的物體細(xì)節(jié)就越多，但過(guò)高的放大倍數(shù)也可能造成圖像失真或模糊。因而，使用光學(xué)顯微鏡時(shí)應(yīng)當(dāng)根據(jù)觀察需求、樣本特性選擇合適的放大倍數(shù)。

此外，光學(xué)顯微鏡的放大倍數(shù)還受到其他因素的影響，如數(shù)值孔徑、分辨率等。

二、數(shù)值孔徑（NA）

數(shù)值孔徑（Numerical Aperture，簡(jiǎn)稱NA）是一個(gè)無(wú)量綱數(shù)，用于衡量光學(xué)系統(tǒng)收集光的能力，具體描述了透鏡收光錐角的大小。

數(shù)值孔徑是判斷物鏡和聚光鏡性能高低的重要標(biāo)志，其大小直接影響了顯微鏡的分辨率、對(duì)比度和亮度等關(guān)鍵參數(shù)。

?計(jì)算方式?：NA=n*sin a

其中n為透鏡與被檢物體之間介質(zhì)的折射率，α為孔徑角（透鏡光軸上的物體點(diǎn)與物鏡前透鏡的有效直徑所形成的角度）的一半。

數(shù)值孔徑大小受到多個(gè)方面的影響：

?①物鏡結(jié)構(gòu)與設(shè)計(jì)?：物鏡的最大半視角、設(shè)計(jì)精度以及設(shè)計(jì)類型均會(huì)影響數(shù)值孔徑。通常，最大半視角越大、結(jié)構(gòu)精度越高、設(shè)計(jì)越先進(jìn)，數(shù)值孔徑也越大。

?②介質(zhì)折射率?：透鏡與被檢物體之間介質(zhì)的折射率越高，數(shù)值孔徑也越大。

?③光源波長(zhǎng)?：光源波長(zhǎng)越短，數(shù)值孔徑通常越小。

?④光學(xué)特性?：物鏡的非球差、折射、色差等光學(xué)特性也會(huì)影響數(shù)值孔徑的大小，良好的光學(xué)特性能夠保證較高的數(shù)值孔徑。

⑤觀察對(duì)象?：數(shù)值孔徑還與觀察對(duì)象的形狀大小有關(guān)，當(dāng)物鏡能夠成像對(duì)象的整個(gè)形狀時(shí)，其最小數(shù)值孔徑可以反映觀察對(duì)象的形狀大小。

三、分辨率?

光學(xué)顯微鏡的分辨率是指顯微鏡能清晰區(qū)分的兩個(gè)物點(diǎn)的最小間距，又稱鑒別率，它反映了顯微鏡對(duì)細(xì)節(jié)進(jìn)行區(qū)分的能力。一般的光學(xué)顯微鏡的最大分辨率約為0.2微米?。

分辨率的計(jì)算公式是σ=λ/NA，其中σ為最小分辨距離，λ為光線的波長(zhǎng)，NA為物鏡的數(shù)值孔徑。

?那么，如何提高分辨率呢？首先可以通過(guò)使用短波長(zhǎng)光源?，降低波長(zhǎng)λ值，來(lái)提高分辨率；其次可以通過(guò)增大介質(zhì)n值或孔徑角α值，以提高NA值，進(jìn)而提高分辨率；還可以通過(guò)調(diào)整顯微鏡的成像條件，增加明暗反差，從而提高分辨率。

四、視場(chǎng)?

視場(chǎng)是指從顯微鏡中能看到的圓形范圍，也叫視野。它代表著顯微鏡能夠觀察到的最大范圍。

在光學(xué)顯微鏡中，視場(chǎng)數(shù)(FN)表示視野大小(FOV)，對(duì)應(yīng)于中間圖像中通過(guò)目鏡可以觀察到的區(qū)域。視場(chǎng)數(shù)(FN)定義為中間像面上可通過(guò)目鏡觀察到的區(qū)域的直徑。

選擇合適的視場(chǎng)數(shù)（FN）需考慮以下因素：

①?觀察需求?：視場(chǎng)數(shù)越大，觀察范圍越廣。根據(jù)觀察樣本的大小和需要觀察的細(xì)節(jié)選擇合適的視場(chǎng)數(shù)?。

②?目鏡與物鏡組合?：視場(chǎng)數(shù)與目鏡和物鏡的放大倍數(shù)息息相關(guān)。目鏡和物鏡放大倍數(shù)越大，視場(chǎng)數(shù)通常越小。因此，需根據(jù)目鏡和物鏡的組合來(lái)選擇合適的視場(chǎng)數(shù)，以獲得最佳觀察效果?。

③?分辨率與視場(chǎng)數(shù)的平衡?：顯微鏡的參數(shù)之間相互聯(lián)系又相互制約，選擇視場(chǎng)數(shù)時(shí)應(yīng)以保證分辨率為準(zhǔn)。過(guò)大的視場(chǎng)數(shù)可能導(dǎo)致分辨率下降，影響觀察效果?。

五、景深?

景深，也稱焦深，是指在顯微鏡觀察和拍攝樣品時(shí)，從對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)的位置開始，改變物鏡與樣品表面距離時(shí)，對(duì)焦能保持清晰的范圍。?

景深由遠(yuǎn)景深度和近景深度組成。遠(yuǎn)景深度是指能成清晰像的最遠(yuǎn)平面與對(duì)準(zhǔn)平面的距離，近景深度則是指能成清晰像的最近平面與對(duì)準(zhǔn)平面的距離。景深等于遠(yuǎn)景深度與近景深度之和。

景深大小決定了顯微鏡觀察時(shí)，能在多大范圍內(nèi)保持圖像的清晰度。景深大，可以看到被檢物體的全層；景深小，則只能看到被檢物體的一薄層。

六、工作距離?

?工作距離是指試樣調(diào)準(zhǔn)焦點(diǎn)時(shí)，物鏡前緣與試樣表面（或蓋玻片頂面）的距離?。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離。

工作距離的大小主要取決于物鏡的參數(shù)。因此，在選擇物鏡時(shí)，需要考慮工作距離的需求，以確保顯微鏡能夠滿足特定的觀察要求。

?長(zhǎng)工作距離物鏡焦距大于普通物鏡，專為液態(tài)材料、液晶、組織培養(yǎng)等鏡檢設(shè)計(jì)，允許在不接觸容器的情況下觀察和研究樣本，工作距離相對(duì)較長(zhǎng)。

?倒置顯微鏡物鏡通常采用長(zhǎng)工作距離設(shè)計(jì)，以適應(yīng)溶液中懸浮物的觀察，如培養(yǎng)液中的細(xì)胞，其工作距離比正置顯微鏡大。

普通物鏡的工作距離因放大倍數(shù)而異，放大倍數(shù)越高，工作距離越短。